替代氧化锌-伊莱特（活性微矿）抗菌实验

伊莱特（活性微矿）抗菌实验

检测单位: 河南省农科院畜牧所

检测样品: 伊莱特（活性微矿）

检验类别: 药敏检测

报告日期: 2017年8月4日

伊莱特（复合矿物）检测实验

1.实验日期：2017年7月1日-2017年7月31日

2.送检单位：韩国龙宫伊莱特株式会社

3.实验目的:检测伊莱特（活性微矿）对猪大肠杆菌（Escherichia coli，E.coli）、猪链球菌(Streptococcus suis,SS)、猪沙门氏菌（Paratyphoid of pigs,SC）和猪副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis，HPS）的影响，以及对比其他药物其效果如何。

4.实验地点：河南省农科院畜牧所

5.实验员：朱文豪张青娴王治方

6.实验方法

6.1 实验材料

伊莱特（活性微矿）由韩国龙宫伊莱特株式会社提供；大肠杆菌、链球菌、沙门氏菌及副猪嗜血杆菌由河南省农科院畜牧所提供；烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD) 由广州鼎国生物有限公司提供；乳牛血清购自北京四季青生物试剂有限公司；麦康凯培养基、胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）和胰蛋白胨大豆肉汤（TSB）培养基均购自北京陆桥技术有限公司；DNA 提取试剂盒等购自大连宝生物公司；SS培养基和药敏纸片购自杭州滨和微生物试剂有限公司。

6. 2 伊莱特（活性微矿）药敏片的制备

6. 2.1药敏片的制备：取定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片，取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎，经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。

6. 2.2药液的制备（用于商品药的试验）：按伊莱特（活性微矿）治疗量0.2-0.3%配制药液。及1000ml水2-3g药，配制药敏片所用的药液，使每个药敏片含量达到50ug/片。

6. 2.3抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液适量，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密封，切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。

6.3 病原菌的复苏培养

将冻干粉的各个菌种从超低温冰箱拿出，加1mL无菌生理盐水混匀之后培养基接种。将大肠杆菌接种在普通琼脂上或者麦康凯培养基上、链球菌接种在TSA 培养基上、沙门氏菌接种在SS培养基上、副猪嗜血杆菌病接种在0.001%NAD 和 5% 乳牛血清的TSA 培养基上培养。37℃培养24h可见大肠杆菌、链球菌、沙门氏菌生长；培养36-48 h可见副猪嗜血杆菌生长。

6.4药敏试验

6.4.1划线接种

在“超净台”（或自制无菌操作台）中，用（酒精灯）经火焰灭菌的接种环从病料中挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式：用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2，然后找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。（另：可将待试细菌于少量生理盐水中制成细菌混悬液，将少量混悬液倒入平皿培养基上，轻晃平皿使铺匀，放置5-10min）。